TRIzol試劑適用于從細(xì)胞和組織中快速分離RNA。TRIzol試劑有多組分分離作用，與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特點(diǎn)是可同時(shí)分離一個(gè)樣品的RNA\\DNA\\蛋白質(zhì).TRIzol使樣品勻漿化，細(xì)胞裂解，溶解細(xì)胞內(nèi)含物，同時(shí)因含有RNase抑制劑可保持RNA的完整性。在加入氯仿離心后，溶液分為水相和有機(jī)相，RNA在水相中。取出水相用異丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中間層可回收DNA；用異丙醇沉淀有機(jī)相可回收蛋白質(zhì)。

　　TRIzol試劑可用于小量樣品（50～100mg組織、5×106細(xì)胞）也適用于大量樣品（≥1g組織、>107細(xì)胞）。對(duì)人，動(dòng)物，植物組織，細(xì)菌均適用，可同時(shí)處理大量不同樣品，整個(gè)提取過(guò)程在一小時(shí)內(nèi)即可完成。

　　分離的總RNA無(wú)蛋白質(zhì)和DNA污染，可用于Northern Blot，dot blot，ployA篩選，體外翻譯，RNase保護(hù)分析和分子克隆。在用于RT-PCR時(shí)如果兩條引物存在于一個(gè)單一外顯子內(nèi)，建議用無(wú)RNase的DNaseⅠ處理RNA樣品，避免出現(xiàn)假陽(yáng)性。共純化的DNA可用作標(biāo)準(zhǔn)，比較不同樣品RNA的得率，也可用于PCR和酶切。蛋白質(zhì)可用于Western Blotting。

　　規(guī)格：100ml 黃色透明液體

　　儲(chǔ)存條件：2～8℃避光保存12個(gè)月

　　注意：請(qǐng)勿直接接觸皮膚或吞咽，以免灼傷。如接觸皮膚應(yīng)立即用洗滌劑和大量水沖洗。忌用乙醇擦洗，乙醇會(huì)加重灼傷程度。

　　預(yù)防RNase污染注意事項(xiàng)：

　　1.經(jīng)常更換新手套，皮膚上常帶有的細(xì)菌，霉菌可能成為RNase的來(lái)源。

　　2.使用滅過(guò)菌的RNA專用塑料制品避免交叉污染。

　　3.RNA在TRIzol試劑中時(shí)不會(huì)被RNase污染，但提取后繼續(xù)處理過(guò)程中應(yīng)使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小時(shí)，塑料制品可在0.5M NaOH中浸泡10分鐘，然后用水徹底清洗，高壓滅菌，即可去除RNase。

　　4.配制溶液應(yīng)使用無(wú)RNase的水（將水加入處理過(guò)不含RNase的玻璃瓶中，加入DEPC至終濃度0.01℅v/v，放置過(guò)夜，高壓滅菌。注：DEPC有致癌之嫌，需小心操作）。

　　RNA的提取

　　準(zhǔn)備試劑：氯仿，異丙醇，75℅乙醇，無(wú)RNase的水或0.5℅SDS（溶液均需用DEPC處理過(guò)的水配制）。

　　操作步驟：

　　1. 勻漿處理：

　　a.組織將組織在液氮中磨碎，每50～100mg組織加入1ml TRIzol，用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。

　　b.單層培養(yǎng)細(xì)胞

　　直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積（即3.5cm直徑的培養(yǎng)板）加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

　　c.細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5～10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1mlTRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。

　　2.將勻漿樣品在室溫（15～30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

　　3.可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2～8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

　　4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

　　5. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

　　6. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1mlTRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。