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實(shí)驗(yàn)方法>DNA定點(diǎn)突變

DNA定點(diǎn)突變

實(shí)驗(yàn)方法

定點(diǎn)誘變(DpnI法)

每條引物都要攜帶有所需的突變位點(diǎn)，引物一般長(zhǎng)25~45bp,設(shè)計(jì)的突變位點(diǎn)需位于引物中部。

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定點(diǎn)突變技術(shù)――從單點(diǎn)突變到多點(diǎn)突變

　體外定點(diǎn)突變技術(shù)是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能之間的復(fù)雜關(guān)系的有力工具，也是我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室中改造/優(yōu)化基因常用的手段。蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)決定其功能，二者之間的關(guān)系是蛋白質(zhì)組研究的重點(diǎn)之一。

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載體多克隆位點(diǎn)（MCS）改造

　加、減、換一個(gè)載體的MCS的位點(diǎn) （給一個(gè)表達(dá) 載體加、減、換小表達(dá)標(biāo)簽，如His6， His10，strep II等，和MCS改造是一樣的），其實(shí)技術(shù) 不是問(wèn)題，問(wèn)題在于位點(diǎn)的選擇，因?yàn)檩d體設(shè)計(jì) 時(shí)應(yīng)該設(shè)計(jì)者也考慮過(guò)mcs的問(wèn)題，應(yīng)該給使用者越多的選擇越好，但為什么有的載體只給有限的幾個(gè)位點(diǎn)呢，一可能是這個(gè)載體其他部位本身含有的限制性切點(diǎn)比較多，因而MCS位置的選擇比較少，二就是設(shè)計(jì)者是自用的載體，沒(méi)有考慮到我們的感受。

來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng) 關(guān)鍵詞：載體克隆位點(diǎn) 改造

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