蛋白質脫鹽有哪些方法
常用的脫鹽方法有透析法、電透析法和凝膠過濾法。透析法及電透析法耗時長,樣品稀釋度大,不易放大進行大規(guī)模生產(chǎn),所以工業(yè)生產(chǎn)中應用較少。凝膠過濾層析脫鹽過程中鹽分子和蛋白質分子大小差異巨大,蛋白質溶液中小分子的鹽分子隨著層析流動相進入孔徑較小的固定相,使其在層析中的遷移速率小,而蛋白質因分子尺寸較大,不能隨流動相進入固定相中,因此在層析柱中的遷移速率大,首先從層析術中流出,實現(xiàn)脫鹽。
用凝膠過濾法脫鹽時,為了使鹽同蛋白質充分地分離,除了應選用足夠長的層析柱之外,還應對樣品的體積加以限制。樣品的體積如果過大就導致蛋白質帶同鹽帶不能分開。一般來就,樣品體積不超過床體積的30%。這一數(shù)據(jù)的確定是根據(jù)鹽和蛋白質的分離體積(Vsep)決定的。兩種物質分離體積的定義為,當兩種物質的混合物在凝膠過濾層析柱上能夠完全分離時的最小體積。
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