一、目的

　　1、熟悉樣品中總砷信量的測(cè)定方法。

　　2、進(jìn)一步熟悉分光光度法。

　　二、原理

　　樣品經(jīng)消化后，利用鋅與酸作用所產(chǎn)生原子態(tài)氫，在碘化鉀和氯化亞錫存在下將樣品中高價(jià)砷還原成三價(jià)砷，與氫作用生成砷化氫，經(jīng)銀鹽溶液吸收后，形成紅色膠體，溶液的顏色呈紅色。顏色的深淺與砷的含量成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。反應(yīng)式如下：

　　三、試劑

　　硝酸、硫酸、鹽酸、氧化鎂、無砷鋅粒

　　硝酸——高氯酸混合液(4+1)：量取80mL硝酸，加20mL高氯酸混勻。

　　硝酸鎂及硝酸鎂溶液：稱取1.5g硝酸鎂[Mg(NO3)2·6H2O]溶于水中，稀釋至100mL。50g/L碘化鉀溶液：貯于棕色瓶中。

　　酸性氯化亞錫溶液：稱取40g氯化亞錫(SnCL2·2H2O)加鹽酸溶解并稀釋至100mL，加入數(shù)顆金屬錫粒。

　　6mol/L鹽酸：量取50mL鹽酸加入稀釋至100mL。100g/L乙酸鉛溶液。

　　乙酸鉛棉花：用100g/L乙酸鉛溶液浸透脫脂棉后，壓除多余溶液，并使疏松，在100℃以下于燥后，貯于玻璃瓶中。

　　200g/L氫氧化鈉溶液。

　　100g/L硫酸：量取5.7mL硫酸加入80mL水中，冷卻后再加入釋釋至100mL。

　　二乙氨基二硫代甲酸銀――三乙醇胺――三氯甲烷溶液：稱取0.25g二乙氨基二硫代甲酸銀[(C2H5)2NCS2Ag]置于乳缽中，加少量三氯甲烷研磨，移入100mL量筒中，加入1.8mL三乙醇胺，再用三氯甲烷分次洗滌乳缽，洗液一并移入量筒中，再用三氯甲烷稀釋至100mL，放置過夜，濾入棕色瓶中貯存。

　　砷標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取0.1320g經(jīng)硫酸干燥器干燥或在100℃干燥2h的三氧化二砷，加5mL 200g/L氫氧化鈉溶液5mL，溶解后10%硫酸25mL，轉(zhuǎn)移入1000mL容量瓶中，用新煮沸冷卻的水稀釋至刻度，貯存于棕色玻塞瓶中。此溶液每毫升相當(dāng)于0.1mg砷。

　　砷標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取1.0mL砷標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于100mL容量瓶中，加1mL10%硫酸溶液，加水稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于1μg。

　　四、儀器

　　(1)分光光度計(jì)。

　　(2)砷化氫吸收裝置

　　五、操作方法

　　1、樣品處理

　　①硝酸-高氯酸-硫酸法：根據(jù)樣品含水量的高低確定取樣量的不同。含水分較少的固體食品取5.0~10.0g的粉碎樣品；醬類食品稱取10.0~20.0g樣品；含水分較高的果蔬類稱取25.0~50.0g打成勻漿的樣品；飲料類可吸取10~20mL。

　　將試樣置于250~500mL定氮瓶中，干燥的試樣可先加少許水潤(rùn)濕，加數(shù)粒玻璃珠，10~15mL硝酸-高氯酸混合液，放置片刻，小心緩緩加熱，待作用緩和后放冷。然后沿瓶壁加入5mL或10mL硫酸，再繼續(xù)加熱，直至瓶中開始變成棕色時(shí)，不斷沿瓶壁滴加硝酸高氯酸混合液使有機(jī)物質(zhì)分解完全。加大火力至產(chǎn)生白煙，溶液呈現(xiàn)澄清無色或微帶黃色，放冷。注意操作過程中防止爆炸。

　　在瓶?jī)?nèi)加20mL水煮沸來除去殘余的硝酸至產(chǎn)生白煙為止。如此處理兩次，放冷。將冷卻后的溶液移入50ml或100ml容量瓶中，用水洗滌定氨瓶，洗滌并入容量瓶中，冷卻，加水至刻度混勻。此溶液每毫升相當(dāng)于1g樣品，相當(dāng)加入硫酸量1ml。取與消化樣品相同量的硝酸高氯酸混合液和硫酸置于另一定氮瓶中，按同一方法作試劑空白試驗(yàn)。

　　②灰化法：稱取5.0g或吸取5.0ml樣品，置于坩堝中(液體樣品需先在水浴上蒸干)，加1g氧化鎂及10ml硝酸鎂溶液混勻，浸泡4h(植物油不用浸泡)。在水浴鍋上蒸干。在電爐炭化至無煙，再移入550℃高溫爐內(nèi)灼燒3~4h，至灰化完全，冷取后取出。

　　加入5ml水濕潤(rùn)灰分，再緩慢加入6mol/L鹽酸10ml,再轉(zhuǎn)移入50mL容量瓶中，坩堝用6mol/L鹽酸洗滌三次，每次3ml，再每次5ml用水洗滌3次，洗液并入容量瓶中。用水定容至刻度，混勻。此溶液10ml相當(dāng)于1g樣品，相當(dāng)于加入鹽酸量(中和需要量除外)1.5ml。

　　取與灰化樣品相同量的硝酸鎂和氧化鎂，按同一方法作試劑空白試驗(yàn)。

　　2、測(cè)定

　　①吸取一定量的濕法消化后的定容溶液(相當(dāng)于5g樣品)及等量的試劑空白液，分別置于250ml容量瓶中，補(bǔ)加硫酸至總量為5ml，加水至50~55mL。

　　吸取0.0.、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml砷標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)0、2、4、6、8、10μg砷)分別置于150mL錐形瓶中，加水至40mL,再加10ml(1＋1)硫酸溶液.

　　②吸取一定量的灰化法消化液(相當(dāng)于5g樣品)及等量的試劑空白液，分別置于150mL錐形瓶中。吸取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL砷標(biāo)使液(相當(dāng)于0、2、4、6、8、10μg砷)分別置于150mL錐形瓶中，加水至43.5mL,再加6.5mL鹽酸。

　　③于樣品消化液。試劑空白液及砷標(biāo)準(zhǔn)溶液中各加3mL 150g/L碘化鉀溶液、0.5mL酸性氯化亞錫溶液，混勻后靜置15min。各加入3g鋅粒，立即分別塞上裝有乙酸鋁棉花的導(dǎo)氣管，并使管的末端插入盛有4mL銀鹽溶液的吸收管中的液面下(不得漏氣)，在常溫下反應(yīng)45min，取下吸收管，用三氯甲烷補(bǔ)足4mL。用1cm比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，在波長(zhǎng)520nm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　六、結(jié)果計(jì)算：

　　X=　　　　　　　　　　　　　　　(3-16)

　　式中：X—-樣品中砷的含量，mg/kg或mg/L;

　　A1—-測(cè)定用樣品消化液中砷的含量，μg；

　　A2 —-試劑空白液中砷的含量，μg；

　　m—-樣品質(zhì)量(體積)，g(ml)。

　　V1――樣品消化液的總體積，ml；

　　V2――測(cè)定用樣品消化液的體積，ml。

　　注意事項(xiàng)

　　1.氯化亞錫(SnCL2)試劑不穩(wěn)定，在空氣中能氧化生成不溶性氯氧化物，會(huì)失去還原劑作用。配置時(shí)加鹽酸溶解為酸性氯化亞錫溶液，加入數(shù)粒金屬錫，持續(xù)反應(yīng)生成氯化亞錫，新生態(tài)氫具有還原性，以保持試劑穩(wěn)定的還原性。氯化亞錫在本試驗(yàn)中的作用是：還原As5+成As3+以及在鋅粒表面沉淀層以抑制產(chǎn)生氫氣作用過猛。

　　2.乙酸鉛棉花塞入導(dǎo)氣管中，是為吸收可能產(chǎn)生的硫化氫，使其生成硫化鉛阻留在棉花上，以免被吸收液吸收產(chǎn)生干擾；因?yàn)榱蚧锟膳c銀離子生成灰黑色的硫化銀。

　　3.二乙氨基二硫代甲酸銀或稱二乙基二硫代氨基甲酸銀鹽，分子式為(C2H5)2NCS2Ag，為黃色粉末，不溶于水而溶于三氯甲烷，性質(zhì)極不穩(wěn)定，遇光或熱，易生成銀的氧化物而呈灰色，所以配制濃度不易控制。如果市售品不適用，實(shí)驗(yàn)室可自行制備，其方法如下：分別溶解1.7g硝酸銀、2.3g二乙氨基二硫代甲酸鈉(DDCNa，銅試劑)于100mL水中，冷卻至20℃以下，緩緩攪拌混合，過濾生成的檸檬黃色銀鹽(AgDDC)沉淀，用冷的蒸餾水洗滌沉淀數(shù)次，在干燥器內(nèi)干燥，避光保存?zhèn)溆谩?/p>

　　吸收液中AgDDC濃度以0.2%~0.25%為宜，濃度過低將影響測(cè)定的靈敏度和重現(xiàn)性。因此，配置試劑時(shí)，應(yīng)放置過夜或在水浴上微熱助溶，輕微的渾濁可以過濾除去。若試劑溶解度不好時(shí)，應(yīng)重新配置，吸收液必須澄清。

　　4.無砷鋅粒不同形狀和不同規(guī)格，因其表面面積不同，與酸反應(yīng)的速度就不同，生成氫氣氣體流速不同，將直接影響吸收效率及測(cè)定結(jié)果。一般地蜂窩狀鋅粒3g，或大顆粒鋅粒5g均可獲得良好結(jié)果。一般確定標(biāo)準(zhǔn)曲線與試樣均用同一規(guī)格的鋅粒為宜。

　　5.樣品消化液中的殘余硝酸需設(shè)法驅(qū)盡，硝酸的存在影響反應(yīng)與顯色，會(huì)導(dǎo)致結(jié)果偏低，必要時(shí)需增加測(cè)定用硫酸的加入量。

　　6.吸收液吸收砷化氫氣體后呈色在150min內(nèi)比較穩(wěn)定。