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植物組織中自由水和束縛水含量的測定

2019.11.12

植物 ?組織中的水分以自由水和束縛水兩種不同的狀態存在。自由水與束縛水含量的高低與植物的生長及抗性有密切關系。自由水/束縛水比值高時,植物組織或器官的代謝活動旺盛,生長也較快,抗逆性較弱;反之,則生長較緩慢,但抗性較強。因此,自由水和束縛水的相對含量可以作為植物組織代謝活動及抗逆性強弱的重要指標。

一、原理:
自由水未被細胞原生質膠體顆粒吸附而可以自由移動、蒸發和結冰,也可以作為溶劑。束縛水則被細胞原生質膠體顆粒吸附而不易移動,因而不易被奪取,也不能作為溶劑。基于上述特點以及水分依據水勢差而移動的原理,將植物組織浸入高濃度(低水勢)的糖溶液中一定時間后,自由水可全部擴散到糖液中,組織中便留下束縛水。自由水擴散到糖液后(相當于增加了溶液中溶劑)便增加了糖液的重量,同時降低了糖液的濃度。測定此降低了的糖液的濃度,再根據原先已知的高濃度糖液的濃度及重量,可求出濃度降低了的糖液的重量。用濃度降低了的糖液的重量減去原來高濃度糖液的重量即為植物組織中的自由水的量(即擴散到高濃度糖液中的水的量)。最后,用同樣的植物組織的總含水量減去此自由水的含量即是植物組織中束縛水的含量。

二、材料、儀器設備 ?及試劑
(一)材料:小白菜、棉花葉片。
(二)儀器設備:1.阿貝折射儀;2.分析天平或電子頂載天平(感量0.1mg);3.烘箱;4.干燥器;5.稱量瓶;6.打孔器(面積0.5cm2左右);7.燒杯;8.瓷盤;9.托盤天平(1/100g);10.量筒
(三)試劑:重量百分濃度為60%~65%的蔗糖溶液:用托盤天平稱取蔗糖60~65g,置燒杯中,加蒸餾水40~35g,使溶液總重量為100g,溶解后備用。

三、實驗步驟
1.植物組織中總含水量的測定
(1)取稱量瓶3只(三次重復,下同),依次編號并分別準確稱重。(2)在田間選取生長一致的待測的植物數株,各選部位、長勢、葉齡一致的有代表性葉子數片。用打孔器鉆取小圓片150片(注意避開粗大的葉脈),立即裝到上述稱量瓶中(每瓶隨機裝入50片),蓋緊瓶蓋并精確稱重。(3)將稱量瓶連同小圓片置烘箱中105℃下烘15min以殺死植物組織細胞,再于80~90℃下烘至恒重(稱重時須置干燥器中,待冷卻后稱)。設稱量瓶重量為W1,稱量瓶與小圓片的重量為W2,稱量瓶與烘干的小圓片的重量為W3(以上重量單位均設為g,下同)。則植物組織的總含水量(%)可按下式計算
植物組織的總含水量(%)=(W2-W3)/(W2-W1)×100
根據上式可分別求出三次重復所得到的組織總含水量的值并進一步求出其平均值。
2.植物組織中自由水含量的測定(1)另取稱量瓶3只,編號并分別準確稱重。(2)用打孔器打取小葉圓片150片(植物材料的選取同上),立即隨機裝入三個稱量瓶中(每瓶裝50片),蓋緊瓶蓋并立即稱重。(3)三個稱量瓶中各加入60%~65%的蔗糖溶液5ml左右,再分別準確稱重。(4)各瓶于暗處置4~6h(經減壓處理后,只需在暗處置1h),其間不時輕輕搖動。到預定的時間后,充分搖動溶液。用阿貝折射儀(見附注)分別測定各瓶糖液濃度,同時測定原來的糖液濃度。設稱量瓶重量為W1,稱量瓶與小圓片的重量為W2,稱量瓶與小圓片及糖液的重量為W4,糖液原來的濃度為C1,浸過植物組織后的糖液的濃度為C2。則植物組織中自由水的含量(%)可由下式算出:
植物組織中自由水的含量(%)=(W4-W2)×(C1-C2)/

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