依賴核酸序列的擴增技術簡述
該技術的檢測反應有賴于AMV逆轉錄酶、噬菌體T7RNA多聚酶、核糖核酸酶H、兩種特別設計的特異性寡核苷酸引物和分子信標探針共同協作而完成。
NASBA全稱是nucleic acid sequence-based amplification,即依賴核酸序列的擴增技術。 依賴核酸序列的擴增技術,是一種擴增RNA的新技術,是由一對引物介導的、連續均一的、體外特異核苷酸序列等溫擴增的酶促反應過程。反應在42℃進行,可以在2h左右將模板RNA擴增約10^9~12倍,不需特殊的儀器。NASBA已經廣泛應用于細菌、病毒等多種病原微生物的檢測。
該技術是由一對特異的引物介導的、三種酶催化的以單鏈RNA 為模板的恒溫擴增技術,具有操作簡單、特異性強、靈敏度高、不易被污染等優點,已廣泛應用于病毒、細菌、霉菌、寄生蟲和細胞因子等的檢測,特別是用于艾滋病病毒、丙肝肝炎病毒等RNA 病毒的檢測當中。在動物疫病預防控制方面, NASBA 方法已成為診斷禽流感病毒的國家診斷標準方法之一(GB/T19440-2004 禽流感病毒NASBA 檢測方法)。同時,在植物病害防疫檢查等方面也有重要用途。
盡管RNA的擴增也可以使用反轉錄PCR技術(通過反轉錄形成單鏈DNA模板),但與NASBA相比,NASBA則有自己的優勢:可以在相對恒溫的條件下進行(一般恒溫為41攝氏度)。該技術主要用于醫學診斷,相對傳統的PCR技術更為穩定、準確。
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