行業標準：進出口肉及肉制品中甲萘威殘留量檢驗方法
中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準SN/T 0122-2011代替 SN 0122-19921
1 范圍
進出口肉及肉制品中甲萘威殘留量檢驗
方法? 液相色譜一柱后衍生熒光檢測法
SN/T 0122-2011
本標準規定了進出口肉及肉制品中甲萘威殘留量的液相色譜一柱后衍生熒光檢測法。
本標準適用于進出口牛肉、雞肉、蝦肉、魚肉及火腿罐頭中甲萘威殘留量的測定。
2 規范性引用文件
??? 下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文
件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
??? GB/T 6682? 分析實驗室用水規格和試驗方法
3? 制樣
3.1? 肉
??? 將所取全部樣品，充分攪碎混勻，取有代表性的樣品，總量不少于500 9，裝入清潔容器內，密封并標
明標記。
3.2罐頭
??? 將所取全部樣品整罐倒出，充分攪碎混勻，取有代表性的樣品，總量不少于500 9，裝入清潔容器密
封并標明標記。
4 試樣保存
??? 試樣應于-18℃以下保存。在抽樣和制樣的操作中，應防止樣品受到污染或發生含量的變化，以
保證實驗樣品能代表總體樣本。
5? 原理
??? 用丙酮一石油醚混合溶液提取樣品中的甲萘威殘留物，經凝膠層析柱凈化后，濃縮，高效液相色譜分
離，經柱后衍生后，用熒光檢測器檢測，外標法定量。
6? 試劑和材料
??? 本標準所用試劑和水在沒有注明其他耍求時，均指分析純試劑，有機試劑為色譜純和GB/T 6682
中規定的三級水。
6.1? 乙腈。
6.2? 乙酸乙酯。
6.3 ?環己烷。
6.4 ?丙酮。
6.5? 石油醚：沸程30℃～60℃。
6.6 ?無水硫酸鈉：650℃灼燒4h，在干燥器內冷卻至室溫，貯于密封瓶中備用。
6.7 ?氯化鈉。
6.8? 柱后衍生試劑。
6.8.1? 氫氧化鈉溶液（0.2%，質量濃度）。
6.8.2? 鄰苯二甲醛( O-Phthaladehyde，OPA)。
6.8.3 ?鄰苯二甲醛稀釋液：硼砂溶液（0. 4%，質量濃度）。
6.8.4? 巰基乙醇(Thiofluor)。
6.8.5? 鄰苯二甲醛試液的配制：溶劑儲罐中注入945 mL OPA稀釋劑，用惰性氣體（氮氣）吹掃至少
10 min．100 mg OPA固體溶解于約10 mL的色譜純甲醇中，將OPA溶液加入除氧的OPA稀釋劑中，
溶解2 9巰基乙醇固體于5 mL OPA稀釋劑中，加入到儲罐中，蓋上瓶蓋，打開氣流，再不斷的吹掃幾分
鐘，關閉排氣閥，輕輕地攪動溶劑以使其完全混合。
6.9? 乙酸乙酯一環己烷混合溶液（I+I，體積比）。
6. 10 0.45_um尼龍濾膜。
6. 11? 甲萘威：分子式C12 H1i N02，CAS編號63-25-2，純度大于99. 5%。
6. 12? 甲萘威標準儲備液：準確稱取適量的甲奈威標準品，以乙腈溶解，4℃冰箱保存，有敖期為
6個月。
6. 13? 甲萘威標準工作液：取一定量的標準儲備液，用乙腈稀釋至適當濃度，4℃冰箱保存，有效期為
1周。
7 ?儀器和設備
7.1? 液相色譜儀：配有熒光檢測器和柱后衍生單元。
7.2全自動凝膠色譜儀（配有餾分收集濃縮器）。
7.3? 旋轉蒸發裝置。
7.4氮吹儀。
7.5組織勻漿機。
7.6振蕩器。
8? 分析步驟
8.1? 提取及凈化
8.1.1? 樣品的提取
??? 稱取試樣20 9（精確到0. OI 9），于IOO mL具塞三角瓶中，加水6 mL（視樣品水分含量加水使總水
量約20 9，肉通常在70%左右，加水6 mL），加40 mL丙酮，勻漿1 min，加氯化鈉6 9，充分搖勻，再加
30 mL石油醚，振搖30 min。取35 mL有機層上清液，經無水硫酸鈉濾于旋轉蒸發瓶中，濃縮至約
1 mL，加2 mL乙酸乙酯一環己烷(6.9)溶液再濃縮，如此重復3次。乙酸乙酯一環己烷(6.9)定容為
5 mL，0.45 Um濾膜過濾，待凈化。
8.1.2? 樣品的凝膠色譜(GPC)凈化
8.1.2.1? 凝膠色譜凈化條件
8.1.2.1.1? 凈化柱：400 mm×30 mm，Bio Beads S-X3，或相當者。
8.1.2.1.2? 流動相：乙酸乙酯一環己烷(6.9)。
8.1.2.1.3? 流速：5.O mL/min。
8.1.2.1.4? 樣品定量環：5 mL。
8.1.2.1.5 ?餾分收集段：10.0 min～15.0 min。
8.1.2.1.6? 凈化柱平衡時間：5 min
8.1.2.2? 凝膠色譜濃縮條件
8.1.2.2.2濃縮終點判定：液位傳感模式。
8.1.2.2.3溶劑替換：2 mL乙腈，重復兩次。
8.1.2.2.4? 定容體積：1 mL。
8.1.2.3? 凝膠色譜凈化步驟
??? 將5 mL待凈化液按8.1.2.1和8.1.2.2規定的條件進行凈化與濃縮，最后得到1 mL凈化液待測定。
8.2? 測定
8.2.1? 液相色譜條件
8.2.1.1? 色譜柱：Cis，250 mm×4.6 mm×5弘m，或相當者。
8.2.1.2柱溫：42℃。
8.2.1.3熒光檢測器：A。。330 nm，Atn1465 nm。
8.2.1.4流動相：乙腈十水（40+60，體積比】。
8.2.1.5流速：1.O mL/min。
8.2.1.6進樣量：20 uL。
8.2.2柱后衍生
8.2.2.1? 衍生試劑1：水解試劑，0. 4%的氫氧化鈉溶液，流速0.4 mL/min。
8.2.2.2? 衍生試劑2：OPA試劑，流速0.4 mL/min。
8.2.2.3反應器溫度：水解溫度為100℃，衍生溫度為室溫。
8.2.3? 色譜測定
??? 根據樣液中被測甲萘威的含量情況，選定濃度相近的標準工作液，其響應值應在方法檢測的線性范
圍內。在上述液相色譜條件下，甲萘威保留時間為II.1 min，色譜圖參見圖A.1。
8.2.4? 空白試驗
??? 除不加試樣外，均按上述步驟進行。
8.2.5? 結果計算
??? 按式(l)計算試樣中甲萘威的含量：
? ??
9測定低限
9.1? 測定低限
??? 本方法的測定低限：0. 005 mg/kg。
