（1）脂肪酸的活化：脂肪酸的氧化首先須被活化，在ATP、CoA-SH、Mg2+存在下，脂肪酸由位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體外膜的脂酰CoA合成酶催化生成脂酰CoA。活化的脂肪酸不僅為一高能化合物，而且水溶性增強(qiáng)，因此提高了代謝活性。

　　（2）脂酰CoA的轉(zhuǎn)移：脂肪酸活化是在胞液中進(jìn)行的，而催化脂肪酸氧化的酶系又存在于線粒體基質(zhì)內(nèi)，故活化的脂酰CoA必須先進(jìn)入線粒體才能氧化，但已知長鏈脂酰輔酶A是不能直接透過線粒體內(nèi)膜的，因此活化的脂酰CoA要借助L-肉堿（L-carnitine），即L-3-羥基-4-三甲基銨丁酸，而被轉(zhuǎn)運(yùn)入線粒體內(nèi)，在線粒體內(nèi)膜的外側(cè)及內(nèi)側(cè)分別有肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶I和酶Ⅱ，兩者為同工酶。位于內(nèi)膜外側(cè)的酶Ⅰ，促進(jìn)脂酰CoA轉(zhuǎn)化為脂酰肉堿，后者可借助線粒體內(nèi)膜上的轉(zhuǎn)位酶（或載體），轉(zhuǎn)運(yùn)到內(nèi)膜內(nèi)側(cè)，然后，在酶Ⅱ催化下脂酰肉堿釋放肉堿，后又轉(zhuǎn)變?yōu)橹oA.這樣原本位于胞液的脂酰CoA穿過線粒體內(nèi)膜進(jìn)入基質(zhì)而被氧化分解。一般10個碳原子以下的活化脂肪酸不需經(jīng)此途徑轉(zhuǎn)運(yùn)，而直接通過線粒體內(nèi)膜進(jìn)行氧化。

　　（3）脂酰CoA的β氧化：脂酰CoA進(jìn)入線粒體基質(zhì)后，在脂肪酸β氧化酶系催化下，進(jìn)行脫氫、加水，再脫氫及硫解4步連續(xù)反應(yīng)，最后使脂酰基斷裂生成一分子乙酰CoA和一分子比原來少了兩個碳原子的脂酰CoA.因反應(yīng)均在脂酰CoA烴鏈的α，β碳原子間進(jìn)行，最后β碳被氧化成酰基，故稱為β氧化。

　　（4）硫解：在β-酮脂酰CoA硫解酶（β-ketoacyl-CoA thiolase）作用下，β-酮脂酰CoA被一分子CoA所分解，生成一分子乙酰CoA和一分子比原來少兩個碳原子的脂酰CoA。少了兩個碳原子的脂酰CoA，可再次進(jìn)行脫氫、水化、再脫氫和硫解反應(yīng)，每經(jīng)歷上述幾步后即脫下一個二碳單位（乙酰CoA）。