免疫熒光組織（細胞）化學染色方法：直接法原理和操...
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法：直接法原理和操作流程
一、原理與意義
免疫熒光組織（細胞）化學染色方法——直接法，是一種熒光抗體染色法。該方法比較簡單，適合做細菌、螺旋體、原蟲、真菌及濃度較高的蛋白質抗原如腎、皮膚的檢查和研究。此法每種熒光抗體只能檢查一種相應的抗原，特異性高而敏感性較低。
二、操作流程
1、染色：切片經固定后，滴加經稀釋至染色效價如1：8或1：16的熒光抗體（如兔抗人γ-球蛋白熒光抗體或兔抗人IgG或IgA熒光抗體等），在室溫或37℃染色30min，切片置入能保持潮濕的染色盒內，防止干燥。
2、洗片：傾去存留的熒光抗體，將切片浸入pH7.4或pH7.2 PBS中洗兩次，攪拌，每次5min，再用蒸餾水洗1min，除去鹽結晶。
3、用50%（用0.5mol/L碳酸鹽緩沖液pH9.0～9.5）甘油封固，并鏡檢拍照。
4、對照染色
①正常免熒光血清染色，如上法處理切片，結果應為陰性。
②染色抑制試驗（一步法）：將熒光抗體和未標記的抗體球蛋白或血清（相同）等量混合，如上法處理切片。結果應為陰性。為證明此種染色抑制不是由于熒光抗體被稀釋所致，可用鹽水代替未標記抗血清，染色結果應為陽性。此法結果較二步法穩定。
③類屬抗原染色試驗，前面已作敘述。
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