新冠病毒各類(lèi)檢測(cè)方法異同 （二）
酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）
ELISA是一種結(jié)合抗原、抗體特異性反應(yīng)和酶對(duì)底物高效催化作用的高敏感性免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。測(cè)定時(shí)，受檢的標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。固相上的酶量與標(biāo)本中的受檢物質(zhì)的量成比例。加入酶反應(yīng)底物后，底物被催化成有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)。所以，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行半定量或定性分析。該檢測(cè)方法靈敏度較高，載體標(biāo)準(zhǔn)化難度較低，但檢測(cè)速度慢、易污染、步驟較為繁瑣。在實(shí)際應(yīng)用中，需要根據(jù)抗原抗體的特性設(shè)計(jì)不同的檢測(cè)法，目前有雙抗體夾心法、免疫抑制法、競(jìng)爭(zhēng)法、直接法&間接法等類(lèi)型。
膠體金免疫層析法
是以膠體金為示蹤標(biāo)志物，應(yīng)用于抗原抗體檢測(cè)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)，氯金酸(HAuCl4)在還原劑作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液。由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金試紙，是將膠體金標(biāo)記的生物大分子在PVC材質(zhì)的試紙固定，留加樣孔，并設(shè)檢測(cè)線和質(zhì)量控制線。在加樣孔上加入樣品后，再滴加液體介質(zhì)，試紙上進(jìn)行層析。根據(jù)試紙上的免疫反應(yīng)發(fā)生結(jié)果，即膠體金位置是否有紅色條帶出現(xiàn)判斷檢測(cè)結(jié)果。
該方法無(wú)需特殊處理標(biāo)本，僅需一滴血即可在15 min內(nèi)通過(guò)肉眼觀察獲取檢測(cè)結(jié)果，突破了現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)對(duì)人員、場(chǎng)所的限制，縮短檢測(cè)時(shí)間，操作方便快速，在基層醫(yī)療單位及現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中廣泛使用。目前針對(duì)新型冠狀病毒，已經(jīng)報(bào)道的有兩種膠體金試紙，一種是檢測(cè)新型冠狀病毒的抗原-雙抗體夾心法，另一種是檢測(cè)患者血液里特異性針對(duì)新型冠狀病毒的IgM抗體-IgM捕捉法。在疫情爆發(fā)期，需要大規(guī)模做陽(yáng)性檢測(cè)時(shí)，適合使用總抗檢測(cè)，同時(shí)聯(lián)卡操作也比較簡(jiǎn)單，只需要操作一次，而分開(kāi)檢測(cè)需要滴加兩次樣，用兩次卡。
化學(xué)發(fā)光免疫分析法
化學(xué)發(fā)光免疫分析法是將高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于各種抗原、抗體、激素等檢測(cè)。該法靈敏度高于ELISA，具有特異性強(qiáng)、線性范圍寬、結(jié)果穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)化等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于臨床標(biāo)本的檢測(cè)。但是該方法對(duì)設(shè)備、操作、使用環(huán)境的要求比較高，使用時(shí)需要配套的化學(xué)發(fā)光儀器。
抗體檢測(cè)的靈敏度和特異度:靈敏度反映診斷試驗(yàn)檢出感染者的能力，若過(guò)低，會(huì)出現(xiàn)較多假陰性結(jié)果，影響疾病的診斷、干預(yù)和預(yù)后，嚴(yán)重可導(dǎo)至患者過(guò)早死亡;特異度衡量診斷試驗(yàn)正確判斷非感染者的能力，若過(guò)低，則會(huì)出現(xiàn)較多假陽(yáng)性結(jié)果，導(dǎo)至醫(yī)療資源的浪費(fèi)，并造成患者及群眾的焦慮和恐慌。因此，具有較高靈敏度和特異度是抗體檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用基礎(chǔ)。
1.3
不同檢測(cè)方法優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比與抗體血清學(xué)檢測(cè)相比，核酸檢測(cè)能夠檢測(cè)到處于窗口期的患者，及早發(fā)現(xiàn)感染者，是新型冠狀病毒檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但是對(duì)檢測(cè)設(shè)備或平臺(tái)要求較高，高靈敏度的RT-PCR儀價(jià)格昂貴，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的潔凈度和操作人員要求也較高。此外，核酸檢測(cè)耗時(shí)較長(zhǎng)，考慮到樣本運(yùn)輸、樣本積壓的情況，通常最快24小時(shí)才可以報(bào)告結(jié)果。
與核酸檢測(cè)相比，抗體血清學(xué)檢測(cè)的血液標(biāo)本更易獲取且標(biāo)本質(zhì)量有保證、操作簡(jiǎn)單快捷、很大程度上降低了醫(yī)護(hù)人員在標(biāo)本采集和檢測(cè)過(guò)程中被感染的風(fēng)險(xiǎn)、更易于基層實(shí)驗(yàn)室展開(kāi)篩查工作等。如果說(shuō)核酸檢測(cè)病毒的核糖核酸(RNA)，是病毒存在的直接證據(jù)，那么抗體檢測(cè)的就是患者血液中被刺激產(chǎn)生的抗體，是間接證據(jù)，對(duì)臨床有提示作用。當(dāng)核酸檢測(cè)陰性時(shí)，將IgM和IgG抗體檢測(cè)增加進(jìn)去，可以彌補(bǔ)核酸檢測(cè)容易造成漏診的缺點(diǎn)。
目前市場(chǎng)上主流的抗體檢測(cè)方法學(xué)是化學(xué)發(fā)光，但化學(xué)發(fā)光平臺(tái)做新冠試劑并沒(méi)有優(yōu)勢(shì)，主要因?yàn)樵摲椒▽?duì)設(shè)備、操作、使用環(huán)境的要求比較高。對(duì)比核酸檢測(cè)，化學(xué)發(fā)光的核心優(yōu)勢(shì)就是取樣及操作簡(jiǎn)易，但沒(méi)有快速檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)。針對(duì)于普通篩查或者說(shuō)針對(duì)于非發(fā)達(dá)國(guó)家，膠體金檢測(cè)方法對(duì)人員、場(chǎng)地、設(shè)備要求都非常低，適用于大規(guī)模的快速檢測(cè)。國(guó)際企業(yè)如羅氏、雅培等在膠體金方面是沒(méi)有技術(shù)儲(chǔ)備的，實(shí)際上全球的膠體金檢測(cè)(包括新冠肺炎、傳染病、流感、瘧疾、性病等)大部分的供應(yīng)量還是在中國(guó)。
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