新冠病毒各類檢測方法異同（三）

2021.6.29

檢測結(jié)果分析

抗原進入機體需經(jīng)過一定的潛伏期才會產(chǎn)生IgM與IgG。在這一期間，血清無法檢出IgM與IgG，核酸檢測能檢測處于窗口期的患者是否受到感染。而抗體檢測在取樣過程和檢測時間等方面都有核酸檢測無法相比的優(yōu)勢。因此在實際檢測過程中需要二者聯(lián)合檢測，綜合判讀，彌補不足。根據(jù)中國官方文件的建議，核酸檢測用于檢測是否受試者攜帶病毒，而抗體檢測用于核酸檢測結(jié)果陰性的疑似患者補充檢測或者聯(lián)合核酸檢測。新冠病毒感染檢測由以核酸為主的階段，轉(zhuǎn)變?yōu)楹怂帷⒖贵w協(xié)同檢測階段。

根據(jù)武漢大學人民醫(yī)院檢驗科徐萬洲等醫(yī)生在2020年2月27日發(fā)表的《血清2019新型冠狀病毒IgM和 IgG 抗體聯(lián)合檢測在新型冠狀病毒感染中的診斷價值》文獻中的研究：該研究采用回顧性研究方法，收集 2020 年 1 月 20 日至 2020 年 2 月 17 日在武漢大學人民醫(yī)院就診的門診和住院患者 284 例，其中 205 例為新型冠狀病毒肺炎患者，包括 2019-nCoV 核酸檢測陽性的確診患者186例，以及 2019-nCoV 核酸檢測陰性但臨床癥狀和CT檢測結(jié)果符合《新型冠狀病毒肺炎防控方案(第五版)》患者19例，作為病例組。排除新型冠狀病毒肺炎的其他疾病患者79例，作為對照組。

采用全自動化學發(fā)光免疫分析技術(shù)對所有研究對象進行血清2019-nCoV IgM和IgG抗體檢測，將 284 例研究對象 2019-nCoV IgM 和 IgG 抗體檢測結(jié)果和核酸檢測結(jié)果進行比較：2019-nCoV 抗體檢測的陽性預測值為95.63%(197/206)，陰性預測值為 91.03%(71/78)，2019-nCoV核酸檢測的陽性預測值為 100%(186/186)，陰性預測值為 80.61%(79/98)。2019-nCoV 抗體和 2019-nCoV 核酸診斷 2019-nCoV 感染的總符合率為 88.03%(250/284)。經(jīng) χ2檢驗，兩種指標診斷 2019-nCoV 感染的差異有統(tǒng)計學意義(χ2=151.99，P<0.05)。對 19 例具有 COVID-19 臨床癥狀及 CT 影像學特征但核酸檢測陰性的臨床確診患者血清學檢測發(fā)現(xiàn)，2019-nCoV IgM 抗體呈陽性反應16 例(84.21%)，2019-nCoV IgG 抗體呈陽性反應18例(94.74%)。

結(jié)果顯示：血清2019-nCoV IgM和2019-nCoV IgG的臨床敏感度分別為70.24%(144/205)和96.10% (197/205)，臨床特異度分別為96.20%(76/79)和 92.41%(73/79)。2019-nCoV 抗體檢測的陽性預測值為 95.63%(197/206)，陰性預測值為91.03%(71/78)，2019-nCoV核酸檢測的陽性預測值為100% (186/186)，陰性預測值為80.61%(79/98)。2019-nCoV抗體檢測和2019-nCoV 核酸診斷2019-nCoV感染的總符合率為 88.03%(250/284)。得出結(jié)論：血清 2019-nCoV IgM和IgG聯(lián)合檢測可作為新型冠狀病毒感染的有效篩查和診斷指標，是新型冠狀病毒肺炎核酸檢測假陰性的有效互補。

在2020年3月4日發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》中，明確將抗體檢測結(jié)果納入確診病例的診斷標準，以及疑似病例的排除標準。如果疑似病例血清特異性IgM和IgG抗體陽性，IgG抗體由陰性轉(zhuǎn)為陽性或恢復期較急性期有4倍及以上升高，則可以診斷其感染了新冠病毒。疑似病例的排除標準，需要同時滿足病毒核酸檢測結(jié)果陰性，以及發(fā)病7天后新冠病毒IgM和IgG抗體仍為陰性兩個條件。

假陽性和假陰性結(jié)果的原因

2020年2月21日，國家衛(wèi)健委印發(fā)《新型冠狀病毒肺炎防控方案(第五版)》，在實驗室檢測技術(shù)指南中明確指出，核酸檢測結(jié)果陰性不能排除新冠病毒感染，需要排除可能產(chǎn)生假陰性的因素。具體因素包括：樣本質(zhì)量差，比如口咽等部位的呼吸道樣本;樣本收集的過早或過晚;沒有正確保存、運輸和處理樣本;技術(shù)本身存在的原因，如病毒變異、PCR抑制等。

核酸檢測假陰性

根據(jù)國家衛(wèi)健委臨床檢驗中心信息，在被感染者中檢出核酸，需同時滿足以下四個條件：

-被感染者的細胞中有一定量的病毒。不同病程、不同病情患者機體中的病毒存在量可能不同，已有病毒感染，但由于在相關(guān)部位采集不到病毒或采集到的病毒量太少，以致現(xiàn)有方法檢測不到，也稱窗口期。

-采集標本時，必須采集到含有病毒的細胞。采集部位不當，如采集口咽拭子時，采集深度不夠;采集鼻咽拭子沒有采到鼻腔深處等，采集到的細胞可能大部分都不含病毒，即可能造成假陰性。

-可靠的體外診斷試劑。國家衛(wèi)健委臨床檢驗中心也表示，部分廠家的試劑產(chǎn)品由于研發(fā)時間短，也沒有使用已知臨床樣本進行必要的性能確認，可能存在對試劑優(yōu)化不充分以及試劑批間差異大等問題。從試劑方面分析原因，可能與試劑引物設(shè)計有關(guān)，也可能與各位點檢測靈敏度相關(guān)。

-規(guī)范的臨床核酸檢測實驗室(合理的分區(qū)、有能力的檢測人員和嚴格的質(zhì)量管理體系)。除了檢測試劑本身，實驗室規(guī)范與否也會對檢測結(jié)果產(chǎn)生重要影響。標本運輸保存條件、臨床實驗室的規(guī)范操作、結(jié)果判讀和質(zhì)量控制等都是保證檢測結(jié)果準確可靠的關(guān)鍵因素。

檢測特異抗體也可以明確患者是否“近期或既往感染過新型冠狀病毒”，有助于核酸檢測陰性但臨床上疑似患者的確診。但是特異抗體檢測陽性不能像病毒核酸檢測陽性一樣作為病毒感染的“金標準”，因為抗體檢測容易受到血液標本中的一些干擾物質(zhì)，如類風濕因子、非特異IgM、溶血所致的高濃度血紅蛋白等的存在而出現(xiàn)“假陽性”結(jié)果。