分子熒光維生素B2含量的測(cè)定
維生素B2含量的測(cè)定
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>
??學(xué)習(xí)分子熒光產(chǎn)生的原理；利用熒光分光光度計(jì)繪制熒光激發(fā)與發(fā)射光譜圖；學(xué)會(huì)判斷譜圖中各種峰的類型的方法。
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二、實(shí)驗(yàn)原理：
??分子吸收短波長(zhǎng)（高能量）的光后，能量釋放以光的形式出現(xiàn)，而發(fā)射較激發(fā)光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的熒光。
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三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：
1.維生素B2熒光激發(fā)光譜與發(fā)射光譜的繪制；
????打開軟件并打開Edit窗口，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)置測(cè)定參數(shù)。
例如：繪制發(fā)射光譜，設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)為377nm（或者454nm），發(fā)射波長(zhǎng)范圍400～700nm。 繪制激發(fā)光譜可設(shè)定發(fā)射波長(zhǎng)為527nm，激發(fā)波長(zhǎng)范圍為200～500nm。
根據(jù)圖形，確定激發(fā)光譜和發(fā)射光譜熒光峰的位置。
2.維生素B2系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制；
????分別取0.1000g/L標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2?、0.4?、0.6?、0.8?、1.0ml定量轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，用去離子水稀釋至25ml。
3.在選定激發(fā)波長(zhǎng)（l1）下測(cè)量系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光發(fā)射光譜，測(cè)定在選定波長(zhǎng)（l2）下的熒光強(qiáng)度并繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；
4.維生素B2片的處理：取維生素B2片（約0.065g）一片，用玻璃棒搗碎后定量轉(zhuǎn)移至250ml容量瓶中，然后取5.00ml溶液稀釋至25.00ml，在選定激發(fā)波長(zhǎng)（l1）下測(cè)量待測(cè)溶液的熒光發(fā)射光譜，測(cè)定在選定波長(zhǎng)下（l2）的熒光強(qiáng)度并計(jì)算維生素B2的濃度（g/L）；
5.根據(jù)以上數(shù)據(jù)，求出維生素B2的含量（以百分比濃度表示x％）。
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四、注意事項(xiàng)：
1.繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線與待測(cè)溶液所選定的波長(zhǎng)l1/l2應(yīng)一致；
2.能正確識(shí)別熒光光譜中的干擾峰（拉曼光等）
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