實驗方法原理

本實驗應用平板計數技術測定水中細菌總數。由于水中細菌種類繁多，它們對營養和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養基在一種條件下，使水中所有的細菌均能生長繁殖，因此，以一定的培養基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中細菌總數僅是一種近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨瓊脂培養基。

實驗材料 待檢水樣

試劑、試劑盒 肉膏蛋白胨瓊脂培養基滅菌水

儀器、耗材 滅菌三角燒瓶滅菌的帶玻璃塞瓶滅菌培養皿滅菌吸管滅菌試管

實驗步驟

1. 水樣的采取

1.1 自來水

先將自來水龍頭用火焰燒灼 3 min 滅菌，再開放水龍頭使水流 5 min 后，以滅菌三角燒瓶接取水樣，以待分析。

1.2 池水、河水或湖水

應取距水面 10～15 cm 的深層水樣，先將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉過來，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿后，將瓶塞蓋好，再從水中取出，最好立即檢查，否則需放入冰箱中保存。

2. 細菌總數測定

2.1 自來水

2.1.1 用滅菌吸管吸取 1 ml 水樣，注入滅菌培養皿中。共做兩個平皿。

2.1.2 分別傾注約 15 ml 已溶化并冷卻到 45 ℃ 左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養基，并立即在桌上作平面旋搖，使水樣與培養基充分混勻。

2.1.3 另取一空的滅菌培養皿，傾注肉膏蛋白胨瓊脂培養基 15 ml，作空白對照。

2.1.4 培養基凝固后，倒置于 37 ℃ 溫箱中，培養 24 h，進行菌落計數。

兩個平板的平均菌落數即為 1 ml 水樣的細菌總數。

2.2 池水、河水或湖水等

2.2.1 稀釋水樣

取 3 個滅菌空試管，分別加入 9 ml 滅菌水。取 1 ml 水樣注入第一管 9 ml 滅菌水內，搖勻，再自第一管取 1 ml 至下一管滅菌水內，如此稀釋到第三管，稀釋度分別為 10-1 、10-2 與 10-3 。稀釋倍數看水樣污濁程度而定，以培養后平板的菌落數在 30～300 個之間的稀釋度最為合適，若三個稀釋度的菌數均多到無法計數或少到無法計數，則需繼續稀釋或減小稀釋倍數。一般中等污穢水樣，取 10-1 、10-2 、 10-3 三個連續稀釋度，污穢嚴重的取 10-2 、 10-3 、10-4 三個連續稀釋度。

2.2.2 自最后三個稀釋度的試管中各取 1 ml 稀釋水加入空的滅菌培養皿中，每一稀釋度做兩個培養皿。

2.2.3 各傾注 15 ml 已溶化并冷卻至 45 ℃ 左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養基，立即放在桌上搖勻。

2.2.4 凝固后倒置于 37℃ 培養箱中培養 24 h。

3. 菌落計數方法

3.1 先計算相同稀釋度的平均菌落數。若其中一個平板有較大片狀菌苔生長時，則不應采用，而應以無片狀菌苔生長的培養皿作為該稀釋度的平均菌落數。若片狀菌苔的大小不到培養皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均勻時，則可將此一半的菌落數乘 2 以代表全培養皿的菌落數，然后再計算該稀釋度的平均菌落數。

3.2 首先選擇平均菌落數在 30～300 之間的，當只有一個稀釋度的平均菌落數符合此范圍時，則以該平均菌落數乘其稀釋倍數即為該水樣的細菌總數（見表 1，例 1）。

3.3 若有兩個稀釋度的平均菌落數均在 30～300 之間，則按兩者菌落總數之比值來決定。若其比值小于 2，應采取兩者的平均數；若大于 2，則取其中較小的菌落總數（見表 1，例 2 及例 3）。

3.4 若所有稀釋度的平均菌落數均大于 300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數（見表 1，例 4）。

3.5 若所有稀釋度的平均菌落數均小于 30，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數（見表 1，例 5）。

3.6 若所有稀釋度的平均菌落數均不在 30～300 之間，則以最近 300 或 30 的平均菌落數乘以稀釋倍數（見表 1，例 6）。