NY/T 4686-2025
直接飼喂微生物和發酵制品類飼料添加劑生產菌株 細菌菌種鑒定 分子生物學方法
Fed directly microorganisms and fermentation products as feed additives, bacterial strain identification, molecular biological methods
NYT4686-2025, NY4686-2025
標準核心內容解析
本標準規定了直接飼喂微生物和發酵制品類飼料添加劑生產菌株的分子生物學鑒定方法，包含兩大技術體系：
| 方法類型 | 技術原理 | 適用范圍 | 判定閾值 |
|---|---|---|---|
| ANI鑒定法 | 全基因組比對計算平均核苷酸一致性 | 已批準/申報菌株 | ANI>96%為同種 |
| 基因序列法 | 16S rRNA/gyrB/pheS基因測序 | 附錄A所列菌種 | 16S>98.65%或gyrB>97% |
關鍵技術要求
1. ANI鑒定法實施要點
- 測序深度：≥50×基因組覆蓋度
- 序列質量：Contig數量≤500個，基因組大小差異≤20%
- 數據分析：需采用專業軟件（如JSpecies等）進行ANI計算
2. 基因序列法操作規范
典型鑒定流程示例：
- 首先進行16S rRNA基因擴增（引物27F/1492R）
- 序列相似性<98.65%時需補充gyrB/pheS基因分析
- 系統發育樹構建要求Bootstrap值≥1000次
標準實施建議
實驗室配置要求
| 設備類型 | 技術參數 | 質量控制 |
|---|---|---|
| 高通量測序儀 | 讀長≥150bp | 符合GB/T 27403 |
| PCR儀 | 溫控精度±0.5℃ | 定期校準 |
菌種管理建議
- 建立標準菌株庫（含CICC 10498T等參考菌株）
- DNA提取應符合GB/T 37874要求
- 檢測報告需包含菌株拉丁學名（符合ICNP規范）
技術演進分析
本標準首次將第三代測序技術納入飼料微生物鑒定體系，相比傳統表型鑒定方法具有三大優勢：
- 鑒定分辨率提升至種水平（16S rRNA僅能鑒定到屬）
- 可識別近緣種的細微基因差異
- 為新型微生物飼料添加劑的申報提供技術依據
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- 標準號
- NY/T 4686-2025
- 別名
- NYT4686-2025
NY4686-2025 - 發布
- 2025年
- 總頁數
- 12頁
- 發布單位
- 行業標準-農業
- 當前最新
- NY/T 4686-2025
- 引用標準
- GB 19489 GB/T 27403 GB/T 37874-2019 GB/T 8170
本文件描述了直接飼喂微生物飼料添加劑菌株和發酵制品類飼料添加劑生產菌株中細菌菌種的分子生物學鑒定方法,包括平均核苷酸一致性( ANI)鑒定法和基因序列鑒定法. 本文件平均核苷酸一致性( ANI)鑒定法適用于已批準或擬申報的直接飼喂微生物飼料添加劑菌株和發酵制品類飼料添加劑生產菌株中細菌菌種的鑒定. 基因序列鑒定法適用于附錄A中所列細菌菌種的鑒定.
| 術語 | |
|---|---|
| 直接飼喂微生物飼料添加劑 | Direct-fed microbial feed additives |
| 發酵制品類飼料添加劑 | Fermented product feed additives |
| 菌種鑒定 | Species identification |
| 測序深度 | Depth of sequencing |
| 疊連群 | Contig |
