T/BDAS 001-2021
牛奶中褪黑素含量的測定液相色譜-串聯質譜法

Determination of melatonin content in milk— Liquid chromatography-tandem mass spectrometry

被代替

2023-03

適用范圍: 本標準規定牛奶中褪黑素含量的測定液相色譜-串聯質譜法，適用于生乳、巴氏殺菌乳、滅菌乳中褪黑素含量的測定。提取方式：取適量樣品置于超聲波清洗機，37℃超聲30 min,使樣品充分混勻。準確移取1 mL試樣置于15 mL離心管中，準確加入4 mL甲醇，使用旋渦混合儀振蕩提取10 min，-18 ℃靜置30 min。使用低溫高速離心機以10000 g、4 ℃離心5 min，上清液過0.22 μm有機相濾膜過濾至樣品瓶，獲得試樣溶液，供液相色譜-串聯質譜測定。技術要點1：甲醇作為褪黑素溶劑，不但不會影響樣品中目標物質的穩定性，還可以使得牛奶中蛋白變性沉淀。將待測樣品和甲醇采用1:4混合，使用甲醇溶劑一步萃取法，無需凈化，減少除脂過程造成的損失。技術要點2：牛奶及其奶制品中含有大量粒度大小不等的脂肪球，超聲波（30 min）在液體中能產生空化作用，擊碎牛奶中的脂肪球。旋渦混合儀振蕩提取10 min，可以離心得到上機液，不損失褪黑素。技術要點3：牛奶中的褪黑素用甲醇提取后，用液相色譜-串聯質譜儀測定，基質匹配外標法定量。本標準中規定了褪黑素的檢出限為0.04 μg/L，定量限為0.10 μg/L；本標準方法的褪黑素回收率為：60~120%，依據GB/T 27404符合在一定濃度水平的回收率范圍；相對偏差（RSD）≤20%。