術(shù)語(yǔ) | 描述 |
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工具酶純度 Enzyme Purity | 目標(biāo)工具酶在樣品總蛋白質(zhì)或固含物中所占的質(zhì)量百分比。 |
蛋白質(zhì)含量 Protein Content | 樣品經(jīng)福林酚法測(cè)定出每毫克或每毫升樣品中的蛋白質(zhì)所占的質(zhì)量。 |
固含物含量 Solid Content | 樣品烘干后獲得的無(wú)水固體物質(zhì)在每毫克或每毫升樣品中所占的質(zhì)量。 |
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) | |
電泳裝置 符合YY/T 0087的要求 | |
凝膠薄層掃描儀 | |
電子分析天平 分度值為0.0001g |
實(shí)驗(yàn)室方便的作法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的一定濃度的聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳,60個(gè)堿基的引物用12%的膠,取0.2OD左右的引物,用尿素飽和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到飽和,上樣前加熱變性(95℃,2 min)。加入尿素的目的一是變性,二是增加樣品比重,容易加樣。600 V 電壓進(jìn)行...
它是一種封閉DNA鏈上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA鏈的5'-PO4與另一DNA鏈的3'-OH生成磷酸二酯鍵。但這兩條鏈必須是與同一條互補(bǔ)鏈配對(duì)結(jié)合的(T4DNA連接酶除外),而且必須是兩條緊鄰DNA鏈才能被DNA連接酶催化成磷酸二酯鍵。 連接酶有T4噬菌體...
(三) DNA連接酶的反應(yīng)條件影響連接效率的因素有:1. 溫度(通常在4-15℃ )2. ATP的濃度(10μM/L - 1mM/L )3. 連接酶濃度(一般平末端大約需1~2U,黏性末端僅需0.1U)4. 反應(yīng)時(shí)間(通常連接過(guò)夜)5. 插入片段和載體片段的摩爾比( 1∶1~5∶1)(四)T4...
基因工程涉及眾多的工具酶可粗略的分為限制酶,連接酶,聚合酶,核酸酶和修飾酶五大類(lèi)。其中,以限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶在分子克隆中的作用最為突出。 DNA限制性?xún)?nèi)切酶: 生物體內(nèi)能識(shí)別并切割特異的雙鏈DNA序列的一種內(nèi)切核酸酶。它是可以將外來(lái)的DNA切斷的酶,即能夠限制異源DNA的侵入并使...
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