一、RNA酶A的小鼠細胞治療介紹

RNA酶A透其次是免疫細胞治療是一種方法，它允許顯示的本地化涉及到細胞的蛋白質的RNA酶敏感的結構。這項技術是高度依賴所使用的RNA酶A的質量在我們的實驗室中，我們用RNA酶A的小鼠細胞治療表明，異染色質蛋白1（HP1）在臂間異染色質蛋白的富集取決于存在一種RNA成分。

二、材料與試劑

CSK緩沖液：（在-20°C貯存）

10m M的管（pH值7.0）

100 mM的氯化鈉

300 MM蔗糖

3 mM氯化鎂

三、實驗步驟

1. RNA酶制劑是從牛胰核糖核酸酶A是一種核糖核酸內切酶，專門切割單stranted RNA的。酶攻擊嘧啶核苷酸的3'-磷酸基和劈開的5'-磷酸聯動的相鄰核苷酸。

RNA酶A，它工作在輔因子和二價陽離子的情況下，可以抑制由RNA酶抑制劑。對RNA酶A的選擇和準備，此協議是至關重要的。核糖核酸酶A的一些公司完全適用于分子生物學的應用程序，但它不能使用的細胞，它只是殺死他們。

2. 在0.01M醋酸鈉（pH5.2）中的10毫克/毫升的濃度溶解RNA酶A；加熱至100℃，15分鐘；允許緩慢冷卻至室溫；通過加入0.1倍體積的1M TrisHCl（pH7.4）中，將pH調節；分裝到裝店在-20°C

3. 細胞提取

為了檢測在細胞核的依賴于RNA的蛋白質的相互作用，細胞首先要被提取用洗滌劑。這一步可以去除而留下更緊密地結合蛋白的可溶性蛋白。

4. 直接貼壁細胞成長到的蓋玻片

洗凈3分鐘，在室溫下用1xPBS；洗凈與CSK，緩沖液 3分鐘，在室溫下；孵育在CSK緩沖器 + 0.5%的Triton X-100在室溫下5分鐘；CSK緩沖液 3分鐘，在室溫下洗滌；用PBS洗兩次，在室溫下3分鐘。

5. RNaseA處理

對RNase A處理的Triton X-100通透細胞（RNA酶濃度，時間和溫度），滴定實驗，以確定最佳條件，用RNA酶A羅氏。顯然的條件來進行調整，這不僅取決于的RNA酶，但也以被處理的細胞類型。

在PBS中加入1 mg/ml 的RNA酶A，在室溫下進行10分鐘；用PBS洗兩次，在室溫下3分鐘；在PBS中的2%多聚甲醛固定15分鐘，在室溫；然后進行染色。特異性的RNA酶消化已知的RNA依賴的標記，如核仁纖維，分散后處理有關的蛋白質的核糖體RNA的成熟，這是已經被監控。

然而，還沒有完全擰入細胞核染色幾個核組分（核膜蛋白，核纖層蛋白B；剪接因子鈧-35；著絲粒蛋白CENP-A，B，和C）將被保留。